hMLH 1 A655G/A多态性和结直肠癌发病关系的研究
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[摘要] 目的：对错配修复基因hMLH1 A655多态性和结直肠癌发病的相关性进行研究。方法：取270名健康人和230例结直肠癌患者的外周血DNA，PCR反应-变性高效液相色谱(PCR-DHPLC)技术和DNA序列分析联用方式对hMLH1 A655多态性进行检测。采用病例对照的方法，对hMLH1 A655多态性与结直肠癌发病的关系进行研究和分析。结果：正常人群和结直肠癌患者中hMLH1 A655G检出率分别为3.0%和11.3%，两组患者比较差异有统计学意义(P<0.01)。患者乳头状或管状腺癌中hMLH1 A655G检出率为8.2%，黏液腺癌中检出率为27.8%。两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。同时研究还发现hMLH1 A655G/A多态性年龄、性别等因素无相关性(P>0.05)。结论：hMLH1 A655 A-G突变在结直肠癌的发病过程中很可能有很大影响，hMLH1 A655多态性可能成为结直肠癌患者康复指标评估的一项。
[关键词] DNA错配修复；结直肠肿瘤；hMLH1；多态性
[中图分类号] R735.3 [文献标识码]A[文章编号]1674-4721(2011)06(b)-007-02
错配修复(mismatch repair，MMR)系统作为一个高保真的DNA修复机制，主要是对DNA合成过程中产生的碱基错配进行修复，保证基因组的稳定性[1]。本文主要对hMLH1基因第8外显子A655位点在结直肠癌患者中的突变情况进行研究，并针对临床病理情况，对此位点多态性与结直肠癌发生的相关性进行研究，现汇报如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
研究对象为本院2010年1~12月诊断为结直肠癌的患者230例，其中，男性患者130例，女性患者100例，平均年龄49岁。对照组为本院270名健康体检者，且对照组直系亲属中没有明确癌症患者。研究组与对照组在性别、年龄上无显著差异。
1.2 方法
1.2.1提取DNA：患者手术当天，进行外周静脉取血，利用QIAampDNA提取试剂盒(德国QIAGEN公司生产)进行提取，依照说明书对全血DNA进行提取，-80℃保存。
1.2.2 PCR反应。
1.2.3变性高效液相色谱(DHPLC)分析。变性高效液相色谱分析仪(WAVE system)为美国Transgenomic公司生产。单次进样量8 μl，柱温57℃，流动相为0.1 mol/L N-三乙基乙酰胺(分析纯)和不同浓度的乙腈，流速为0.9 ml/min，检测条件：260 nm紫外。
1.2.4 DNA序列分析。变性高效液相色谱分析显示，能够检测到特定异常峰形的PCR产物，产物经过北京华大基因公司进行测序。
1.3 统计学方法
计算研究组和对照组hMLH1基因突变检出率差异的显著性检验及优势比(odds ratio，OR)，采用Epi Info 6.1Mb软件进行χ2检验。
2 结果
2.1 变性高效液相色谱分析和DNA测序结果
57℃时，研究组有26份(11.3%)样品有2个洗脱峰出现，对照组有4份(3.0%)样品出现这一情况。测序结果显示，出现2个洗脱峰的样本655位点存在遗传性碱基转换(A→G)。两组hMLH1 A655G检出率差异有统计学意义(11.3% vs 3.0%，χ2=6.791，P=0.009)。
2.2 hMLH1A655G/A多态性和临床病理资料的相关性
见表1。患者乳头状或管状腺癌中hMLH1 A655G检出率为8.2%，黏液腺癌中检出率为27.8%。两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
hMLH1 A655位点编码的氨基酸位置在hMLH1蛋白N端ATP酶结合域，所以说这一突变能够对ATP酶的活性产生影响，导致hMLH1蛋白活性下降[2]。所以对hMLH1A655G进行检测在结直肠癌风险评估过程中有很大的价值。
PCR-DHPLC技术能够应用对基因多态性进行检测，目前研究结果的可信度已得到研究人员的肯定[3]。本研究中采用这一技术对结直肠癌患者中hMLH1 A655多态性进行检测，研究结果表明，正常人群和结直肠癌患者中hMLH1 A655G检出率分别为3.0%和11.3%，两组患者比较差异有统计学意义(P<0.01)。这和文献结果[4-7]一致。
总之，hMLH1 A655G的突变能够下调hMLH1蛋白的生物学活性，这和结直肠癌的发病过程密切相关，所以hMLH1 A655G多态性的检测有可能可以逐步发展为结直肠癌患者康复效果的评估指标之一。
[参考文献]
[1]Ollila S,Dermadi Bebek D,Jiricny J,et al.Mechanisms of pathogenicity in human MSH2 misseese mutants[J].Hum Mumt,2008,29(11):1355-1363 ......
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